《农产品质量安全检测技术培训系列之

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1、农残检测常用方法技术要点农残检测常用方法技术要点卞红正卞红正安徽省农产品质量安全检测中心安徽省农产品质量安全检测中心农业部农产品质量安全监督检验测试中心（合肥）农业部农产品质量安全监督检验测试中心（合肥）农产品质量安全检测技术系列之农产品质量安全检测技术系列之主要内容速测方法3准确定性定量检测法4当前常用检测方法2前言1以前农残检测方法的颁布：国家标准化管理委员会颁布国家标准国家标准化管理委员会颁布国家标准（GBGB）; ;农业部颁布行业标准农业部颁布行业标准（NYNY）; ;国家进出口商品检验检疫总局颁布行业标准，编号国家进出口商品检验检疫总局颁布行业标准，编号为为SNSN。已颁布标准截至截

2、至目前，已颁布的农产品和食品农药残留检测方法目前，已颁布的农产品和食品农药残留检测方法标准共有标准共有39390 0多多个个。其中其中：国家标准国家标准9292个个，农业行业标农业行业标准准3535个个，商检行业商检行业标准约标准约270270个。个。前 言 根据根据20092009年年6 6月月1 1日实施的中华人民共和国食品安日实施的中华人民共和国食品安全法第二十一条和第二十二条的规定，今后凡涉全法第二十一条和第二十二条的规定，今后凡涉及食品安全的标准（八个方面），统一由及食品安全的标准（八个方面），统一由国务院国务院卫卫生行政部门部制定和颁布生行政部门部制定和颁布，国务院标准化行政部门，

3、国务院标准化行政部门提供国家标准编号提供国家标准编号 。 对现行的食用农产品质量安全标准、食品卫生标准、对现行的食用农产品质量安全标准、食品卫生标准、食品质量标准和有关食品的行业标准中强制执行的食品质量标准和有关食品的行业标准中强制执行的标准予以整合，统一公布为食品安全国家标准。标准予以整合，统一公布为食品安全国家标准。 农残检测方法标准全部统一为农残检测方法标准全部统一为食品安全食品安全国家标准。国家标准。前 言1.速测方法GB/T 5009.199-2003蔬蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测类农药残留量的快速检测NY/T 448-2001蔬菜蔬菜上有机磷

4、和氨基甲酸上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检酯类农药残毒快速检测方法测方法一、当前常用检测方法NY/T 761-2008蔬菜和水果中有机磷、蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定药多残留的测定QuEChERS Method（美国农业部农业（美国农业部农业研究服务中心）修订方法研究服务中心）修订方法NY/T 761-2008 、GB/T 19648-2006水果和蔬菜水果和蔬菜中中500种农药及相关化学品残留的测定种农药及相关化学品残留的测定 气相色谱气相色谱-质谱法质谱法、GB/T 20769-2008水果和蔬菜中水果和蔬菜中4

5、50种农药及相关化学品残留量的测定种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱液相色谱-串串联质谱法联质谱法等方法糅合在一起的实施细则等方法糅合在一起的实施细则2.准确定性定量检测法一、当前常用检测方法二、速测方法1快速检测程序试样试样检测检测 阴性阴性阳性阳性复测（两次以上）复测（两次以上）阴性阴性阳性阳性根据市场根据市场规定处理规定处理 准确定量准确定量定性定性分析分析二、速测方法GB/T 5009.199-2003NY/T 448-2001适用范围围 蔬菜（葱蒜、萝萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭茭白、蘑蘑菇菇和番茄含有抑制酶的植物次生物质质，易导导致假阳阳性；叶绿绿素高的也会会干扰扰，这两类这两

6、类可整株取样样） 适用叶菜(除韭菜)、果菜、豆菜、瓜菜、根菜(除萝萝卜、茭茭白等)方法速测测卡法(纸纸片法)和酶抑制率法(分光光度法)酶抑制率法(分光光度法)波长长412nm4103nm酶乙酰酰胆碱酯碱酯酶（用pH8磷酸缓缓冲液溶解）（3min吸光度变变化值值0.3，4冰箱保存不超过过4天）丁酰酰胆碱酯碱酯酶（用pH8磷酸缓缓冲液溶解）3min吸光度变变化值值0.40.8之间间底物硫代乙酰酰胆碱碱（蒸馏馏水溶解，4冰箱保存不超过过2周）碘碘化硫代丁酰酰胆碱碱（BTCI）（用pH8磷酸缓缓冲液溶解）显显色剂剂二硫代二硝基苯苯甲酸（DTNB）+碳碳酸氢钠氢钠缓缓冲液溶液，4冰箱保存二硫代二硝基苯苯

7、甲酸（DTNB）缓缓冲液溶解步骤骤取表面干净净的蔬菜或瓜果，叶菜类类取叶片部分，瓜果取表皮带带肉，剪成1cm左右见见方碎片。取样样1g置于小烧烧杯内内，加入5mL缓缓冲溶液，振荡荡1-2min，倒出并静并静置3-5分钟钟；于小试试管内内分别别加入2.5mL样样本提取液、100uL酶液、100uL显显色剂剂，摇匀摇匀后于37放置15min以上，加入100uL底物，应应立即倒入仪仪器比色皿中，记录记录3min吸光度变变化值值。取2g切碎的样样本（非叶菜类类取4g）放入提取瓶内瓶内，加入20mL缓缓冲液，振荡荡1-2min，倒出并静并静置3-5分钟钟；于小试试管内内分别别加入50uL酶液、3mL样样

8、本提取液、50uL显显色剂剂，于37-38下放置30min后分别别加入50uL底物，倒入比色皿中，用仪仪器测测定。结结果抑制率50%：阳阳性（阳阳性样样品需要重复检测复检测2次以上，若不合格, 用色谱谱、质谱质谱等进进一步定性定量分析）抑制率70%：阳阳性（阳阳性样样品应应有2次以上的重复检测复检测，若不合格, 用色谱谱、质谱质谱等进进一步定性定量分析）备备注1、当温当温度低于37时时，酶反应应速度放慢，加入酶液和显显色剂剂后反应时间应时间应该应该延长长，延长时间长时间的确定，应应以空白对对照测试测试3min吸光度变变化值值0.3方可进进行下一步操作。2、3min吸光度变变化值值0.3原因：酶

9、的活性不够够；酶的活性太低。3、样样品检测检测放置时间与时间与空白的时间应该时间应该一致。1、样样品检测检测放置时间与时间与空白的时间应该时间应该一致。2、丁酰酰胆碱酯碱酯酶对乐对乐果、甲基对对硫磷、毒死蜱蜱、二嗪嗪磷等农药农药不太灵灵敏，检检出浓浓度均在10mg/kg以上。二、速测方法2结果计算抑制率（抑制率（% %）= = 抑制率：酶被抑制的程度抑制率：酶被抑制的程度A Ac c 对照组对照组3min 3min 后与后与3min 3min 前吸光值之差前吸光值之差; ; A A 样本样本3min 3min 后与后与3min 3min 前吸光值之差。前吸光值之差。100cscAAA二、速测方

10、法3注意事项20112011年首届全省农产品质量安全检测技术人员大比武现场操作年首届全省农产品质量安全检测技术人员大比武现场操作评分细评分细则（农残速测类）则（农残速测类） (2011(2011年年) )中对中对取样部位、处理方法取样部位、处理方法等等内容进行详细内容进行详细的分项打分，这些打分项都是平时检测中需要注意的地方。的分项打分，这些打分项都是平时检测中需要注意的地方。适用范围：蔬菜（葱蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番适用范围：蔬菜（葱蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄含有抑制酶的植物次生物质，易导致假阳性；叶绿素高的也会干扰，茄含有抑制酶的植物次生物质，易导致假阳

11、性；叶绿素高的也会干扰，这两类可整株取样）这两类可整株取样） ；农药：有机磷和氨基甲酸酯类。；农药：有机磷和氨基甲酸酯类。所有操作步骤顺序、加液量、处理时间一定要严格按标准执行。所有操作步骤顺序、加液量、处理时间一定要严格按标准执行。建议使用同一批比色皿，不同批次的比色皿对结果可能存在影响。一建议使用同一批比色皿，不同批次的比色皿对结果可能存在影响。一批上机样品同时检测，共用一个对照。批上机样品同时检测，共用一个对照。 检测前一定要检查酶液活性（检测前一定要检查酶液活性（3min3min吸光度变化值吸光度变化值0.30.3）；酶液反复）；酶液反复解冻最多不超过两次解冻最多不超过两次, ,否则会