罗氏COBAS Taqman检测在临床中的应用6-24

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1、罗氏罗氏COBAS TaqmanCOBAS Taqman病毒载量检测在病毒载量检测在肝炎诊疗中的应用肝炎诊疗中的应用COBAS TaqMan COBAS TaqMan 肝炎病毒载量检测肝炎病毒载量检测 更灵敏，更灵敏， 更准确更准确 肝炎治疗好搭档肝炎治疗好搭档HBV HBV 感染是全球性卫生问题感染是全球性卫生问题 33% 的人在一生中会感染HBV; 成年感染者中5%-10%会转为慢性乙肝, 全球约有3.5亿慢性HBV感染者; 每年,有100万人死于与乙型肝炎相关的肝硬化或者肝癌; = 每30s 夺走一个生命 感染率最高的区域在亚洲,非洲.Lavanchy. J Viral Hepat 20

2、04; World Health Organization, 2008; Elgouhari, Cleve Clin J Med 2008不同安全、疗效和耐药性的新药面世肝炎治疗的进展肝炎治疗的进展Pegasys 2005Telbivudine 2006Lamivudine 1998Adefovir 2002Entecavir 2005伴随着实验室评估和监测的改善治疗方案必须整合诊断、检测和治疗过程中的变化来制定Tenofovir 2008不同的标志物提供不同的诊断以及治疗监控的信息不同的标志物提供不同的诊断以及治疗监控的信息诊断诊断启动治疗启动治疗鉴别鉴别初始应答初始应答预测预测治疗应答治疗

3、应答监测耐药监测耐药证明证明持续应答持续应答HBsAgHBsAgHBsAgHBsAg定量定量抗抗-HBs-HBsHBeAgHBeAg抗抗-HBe-HBe抗抗-HBc-HBcHBV DNAHBV DNAALTALTModified from Pawlotsky et al. Gastroenterol 2008HBV DNA检测在CHB疾病管理中的意义 评估疾病阶段评估疾病阶段 预测疾病进程预测疾病进程 优化抗病毒治疗优化抗病毒治疗 开始治疗开始治疗 治疗期间监测治疗期间监测 (“(“治疗路线图治疗路线图”) ) 监测耐药监测耐药 治疗终点治疗终点HBV DNA检测贯穿于乙肝治疗的整个过程高灵敏

4、、准确可靠的检测结果才能有效地指导临床治疗启启动动治治疗疗2000 IU/mL不充分应答不充分应答60-2000 IU/mL部分部分应应答答Week 12: 鉴别鉴别原原发发性无性无应应答答HBV-DNAHBV-DNA水平较基线水平下降幅度水平较基线水平下降幅度1log/ml1log/mlWeek 24: 疗疗效早期效早期预测预测HBV DNA启动治疗、鉴别初始应答、预测治疗应答由美国坦福大学医学中心由美国坦福大学医学中心KeeffeKeeffe教授（专家组）提供教授（专家组）提供Keeffe et al Clin Gastroenterol Hepatol 2007继续继续治治疗疗监测监测H

5、BV-DNA/6个月个月增加基因增加基因变变异特点不同异特点不同药药物治物治疗疗监测监测HBV-DNA/3个月个月增加增加/ /更换有效的药物治疗更换有效的药物治疗监测监测HBV-DNA/3HBV-DNA/3个月个月正确选择治疗的时机，尤其是对肝硬化低病载的患者正确选择治疗的时机，尤其是对肝硬化低病载的患者评价疗效更准确评价疗效更准确决定治疗方案（药物的剂量？单药还是联合？疗程？决定治疗方案（药物的剂量？单药还是联合？疗程？) )监测耐药，及时改变策略（换药？联合？）监测耐药，及时改变策略（换药？联合？）谨慎合理停药，减少复发谨慎合理停药，减少复发高灵敏，准确可靠的HBV DNA检测对临床治疗

6、至关重要国产PCR试剂外标法(标准曲线法)10710610510410?10?外标法的缺点：外标法的缺点：未考虑标本的个体差异、不同管未考虑标本的个体差异、不同管间扩增效率的差异、不同批次操间扩增效率的差异、不同批次操作者主观因素及污染对结果的影作者主观因素及污染对结果的影响响 未对低于未对低于10104 4扩增进行定标，扩增进行定标，因此无法准确判读低水平特异性因此无法准确判读低水平特异性扩增扩增无溯源数据无溯源数据罗氏罗氏cobascobas TaqmanTaqman核酸检测核酸检测提供的不仅仅是全自动提供的不仅仅是全自动更是更是准确可靠准确可靠的结果的结果AmpErase防污染酶防污染酶

7、闭管进，闭管出闭管进，闭管出仪器自带紫外灯消毒仪器自带紫外灯消毒高保守扩增片段的高保守扩增片段的选择，防止漏检选择，防止漏检内标定量法，定量更内标定量法，定量更准确准确罗氏独有的内部标准品定量方法罗氏独有的内部标准品定量方法 消除管间差异 内部质控品 无需外部定标 避免额外定标产生的损耗内部标准品（内部标准品（Quantification Standards, QSQuantification Standards, QS）: : 将已知浓度的人工构建核酸，加入至每个样本管中，与样本一同提取、扩增；根据内标的Ct值对样本定量样本扩增曲线样本扩增曲线内标扩增曲线内标扩增曲线The COBAS Ta

8、qMan HBV Test targets the precore/core region Highly conserved in all genotypes Avoids common mutations YMDD Double core promoter mutations Precore mutation Clinically validated* * * *Hunt C.M., et al. (2000). Hepatology 31, 10371044.Choice of PCR target is fundamental Choice of PCR target is fundam

9、ental to assay performanceto assay performance* * * *TargetTarget高保守扩增片段的选择，防止漏检高保守扩增片段的选择，防止漏检COBASCOBAS AmpliPrepAmpliPrep/COBAS/COBAS TaqMan TaqMan48/9648/96全球全球第一台全自动实时荧光第一台全自动实时荧光定量定量 PCRPCR平台平台样品进样品进-结果出结果出自动化自动化只为提供更准确的结果只为提供更准确的结果COBASCOBAS TaqMan TaqMan 肝炎核酸检测肝炎核酸检测提供卓越的检测性能提供卓越的检测性能C COBAS

10、 TaqmanOBAS Taqman HBV HBV DNADNAC COBAS TaqmanOBAS Taqman H HC CV V RNARNA灵敏度灵敏度2020 IU/mLIU/mL15 IU/mL15 IU/mL线性范围线性范围20 1.7 x 108 IU/mL15 1.0 x 108 IU/mL特异性特异性100% 100%覆盖基因型覆盖基因型A-H; pre-core mutantsGt 1-6COBAS TaqManCOBAS TaqMan肝炎病毒载量检测肝炎病毒载量检测 更灵敏，更灵敏， 更更准确准确 肝炎治疗好搭档肝炎治疗好搭档HBV DNAHBV DNA检测性能比较检

11、测性能比较cobas Taqman cobas Taqman 检测提供更卓越的性能检测提供更卓越的性能COBAS TaqmanCOBAS Taqman检测检测普通国产检测普通国产检测COBAS TaqmanCOBAS Taqman优越性优越性灵敏度灵敏度20 IU/mL500-1000 IU/mL对低浓度样本准确检出，更准确反映应答情况线性范围线性范围20 1.7 x 108 IU/mL1000 1 x 108 IU/mL宽泛的线性范围，覆盖大部分临床样本，减少二次检测定量方法定量方法内部标准品法外部标准品法避免PCR反应管间差异，确保定量准确自动化自动化全自动手工操作提高检测重复性；避免污染