第二章__清洗与消毒.
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1、第二章第二章 清洗与消毒清洗与消毒 清洗和消毒是否彻底直接关系清洗和消毒是否彻底直接关系到细胞培养的成败。掌握清洗、消到细胞培养的成败。掌握清洗、消毒知识，学会清洗、消毒方法是细毒知识，学会清洗、消毒方法是细胞培养工作的基本功。胞培养工作的基本功。一、一、 清洗清洗、清洗目的：去除杂物，降低带菌量清洗目的：去除杂物，降低带菌量、根据洗涤根据洗涤对象的不同对象的不同，主要分为：，主要分为：（包括玻璃、塑料、搪瓷、（包括玻璃、塑料、搪瓷、 不锈钢器皿等）不锈钢器皿等）1 1、玻璃用品的清洗、玻璃用品的清洗 在细胞培养中，工作量最大的是玻璃器皿的清在细胞培养中，工作量最大的是玻璃器皿的清洗。清洗后的
2、玻璃器皿不仅洗。清洗后的玻璃器皿不仅要求干净透明、无油要求干净透明、无油迹，而且不能残留任何物质。迹，而且不能残留任何物质。某些化学物质仅百某些化学物质仅百万分之一毫克，就会对细胞产生毒性作用。因此，万分之一毫克，就会对细胞产生毒性作用。因此，玻璃器皿的清洗必须严格按照程序进行。玻璃器皿的清洗必须严格按照程序进行。 一般玻璃器皿的清洗包括：一般玻璃器皿的清洗包括： 浸泡浸泡 初次使用和培养用后的玻璃器皿都需初次使用和培养用后的玻璃器皿都需先先用清水浸泡用清水浸泡，以使附着物软化或被溶掉。培，以使附着物软化或被溶掉。培养后的玻璃器皿多附有大量蛋白质，用完后养后的玻璃器皿多附有大量蛋白质，用完后应
3、立即初步刷洗，浸泡在蒸馏水中，注意应立即初步刷洗，浸泡在蒸馏水中，注意让让水完全进入瓶皿中，不要留有气泡水完全进入瓶皿中，不要留有气泡。使用新使用新的器皿应先用自来水简单刷洗，然后用稀盐的器皿应先用自来水简单刷洗，然后用稀盐酸酸(5(5) )浸泡过夜或煮沸浸泡过夜或煮沸3030分钟，中和其中的分钟，中和其中的碱性物质后再清洗。碱性物质后再清洗。 刷洗刷洗 浸泡后的玻璃器皿要用浸泡后的玻璃器皿要用软毛刷软毛刷和优质洗涤和优质洗涤剂（加热）刷洗。剂（加热）刷洗。 浸酸浸酸 刷洗不掉的极微量杂质经过清洗液浸刷洗不掉的极微量杂质经过清洗液浸泡的强氧化作用可被除掉。清洗液对玻璃泡的强氧化作用可被除掉。清
4、洗液对玻璃器皿无腐蚀作用，去污十分有效，是清洗器皿无腐蚀作用，去污十分有效，是清洗过程中关键环节。过程中关键环节。酸液的配制 清洗液可根据需要，配制成不同强度：常用的有下面三种：清洗液可根据需要，配制成不同强度：常用的有下面三种： 重铬酸钾重铬酸钾6363g g，浓硫酸浓硫酸10001000mlml，蒸馏水蒸馏水200200mlml 强液强液 重铬酸钾重铬酸钾120120g g，浓硫酸浓硫酸200200mlml，蒸馏水蒸馏水10001000mlml 次强液次强液 重铬酸钾重铬酸钾l00gl00g，浓硫酸浓硫酸l00mll00ml，蒸馏水蒸馏水10001000mlml 弱液弱液 选用耐酸塑料桶或
5、不锈钢桶配制为宜。 先将重铬酸钾溶于水（用玻璃棒搅拌助溶，有时不能完全溶解）。 缓缓加入浓硫酸，切忌过急，否则将产热而发生危险(绝不可将重铬酸钾倒入浓硫酸中)。 清洁液配好呈棕红色，待变绿色时表明失效。由于清洁液的腐蚀性极强，配制与应用时必须小 心，并做好防护。清洁液的使用注意事项 冲洗冲洗 玻璃器皿浸酸后必须用玻璃器皿浸酸后必须用流水流水充分冲充分冲洗，每个器皿用流水灌满、倒掉，必须洗，每个器皿用流水灌满、倒掉，必须重复重复1010次次以上，不留任何残迹。最后用以上，不留任何残迹。最后用蒸馏水漂洗蒸馏水漂洗3 3- -5 5次次，烤干备用。，烤干备用。 另：根据洗涤对象的具体情况可分为以下三
6、种另：根据洗涤对象的具体情况可分为以下三种：特殊洗涤特殊洗涤微生物大量污染的洗涤微生物大量污染的洗涤常规洗涤常规洗涤 常规洗涤常规洗涤 自来水洗去油渍、霉菌等脏物；自来水洗去油渍、霉菌等脏物； 温肥皂水中浸泡一定时间后用刷子刷净；温肥皂水中浸泡一定时间后用刷子刷净；自来水冲洗干净，至瓶壁不挂水珠为止；自来水冲洗干净，至瓶壁不挂水珠为止； 蒸馏水淋洗内外壁蒸馏水淋洗内外壁 将玻璃器皿倒置：晾干或烘干（将玻璃器皿倒置：晾干或烘干（5075） 放入除尘柜中备用放入除尘柜中备用 微生物大量污染的洗涤微生物大量污染的洗涤 微生物污染器皿加压灭菌后再洗涤灭菌后再洗涤特殊洗涤特殊洗涤（如（如沾有蛋白质类物质
7、或其它有机物时) 经过常规洗涤未过蒸馏水的器具，浸泡入洗液（铬酸洗涤液是用重铬酸钾(K2Cr2O7)与硫酸(H2SO4)配制而成）中数分至数小时； 回收洗液，器具先用自来水洗净，蒸馏水淋洗，烘干（75）2 2、橡胶用品的清洗、橡胶用品的清洗 浸泡浸泡 2 2NaOHNaOH煮沸煮沸15-20 15-20 minmin 自来水冲洗自来水冲洗 1 1稀盐酸稀盐酸浸泡浸泡3030minmin 蒸馏水蒸馏水/2-3/2-3次次自来水冲洗自来水冲洗双蒸双蒸/1/1次次晾干后备用晾干后备用3 3、塑料器皿的清洗、塑料器皿的清洗 浸泡浸泡 脱脂棉脱脂棉清拭清拭/ /冲洗冲洗 2 2NaOHNaOH浸泡过夜浸
