基因工程专题3-PPT精品.ppt

基因工程专题3-PPT精品
目的基因（主要指编码蛋白质的基因）的获取的常用的方法：（1）从基因文库中获取目的基因：
①直接从生物体中提取总DNA，构建基因组文库，从中调用目的基因；②以mRNA为模板，反转录合成互补的cDN***段,构建cDNA文库，从cDNA文库中获取目的基因； （2）利用聚合酶链式反应（PCR）特异性地扩增所需要的目的基因片段；
（3）如果基因比较小，基因序列已知，通过化学合成仪用化学方法直接人工合成。
基因文库的构建------细胞内总DNA的提取和分离程序
基因文库的构建-----将总DNA包含的基因组各片段分别克隆在质粒或噬菌体运载体上，便构成了该生物的基因文库。
1.怎样从基因文库中获取所需的目的基因呢？
目的基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因转录产物mRNA，以及基因表达产物蛋白质等特性获取目的基因。
从基因组文库中获取目的基因存在的问题
费时费事,内含子序列。
利用反转录人工合成互补DNA 构建的cDNA文库中提取目的基因------获取的DN***段往往是具有特定功能的目的基因
基因组文库：某种生物的基因组的全部遗传遗传信息通过克隆载体贮存在一个受体菌的群体之中，这个群体即为这种生物的基因组文库。若这个群体只贮存某种生物的基因组的部分遗传信息，则称为部分基因组文库。
cDNA基因文库：某种生物基因组转录的部分或全部mRNA经过逆转录产生的各种cDN***断分别与克隆载体重组，贮存在一群受体菌群体中，这样的群体称为cDNA基因文库。
基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DN***断，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库
一般外源DNA(目的基因)是不易进入受体细胞的，即使采用物理化学方法将外源基因导入受体细胞后，也不容易在受体细胞中维持，保持稳定。通过不同途径能将承载的外源基因或DN***断导入受体细胞，并在其中得以维持的DNA分子称为DNA克隆载体或基因克隆载体。作为克隆载体应该具有什么条件？
1.克隆运载体DNA具有多个限制酶切点……
2.能在宿主细胞中保存，或插入染色体中……复制……
3.具有标记基因……
4.安全……