单次剂量酒精撤退对海马神经元突触外δ-GABA A受体的调节及机制研究.pdf

单次剂量酒精撤退对海马神经元突触外δ-GABA_A 受体的调节
及机制研究
γ -氨基丁酸 A 型受体(GABAA 受体)是一种配体门控***离子通道,是由多个亚
基装配而成的五聚体,它介导了脑内大多数抑制性神经传递的过程,并且它还是
镇静催眠类药物包括酒精在内的主要靶点。酒精可以变构地增强 GABAA 受体的功
能[1,2],而慢性酒精激活则可能导致 GABAA 受体出现可塑性变化,产生酒精耐受,
酒精依赖以及酒精戒断综合征(AWS)。突触外含δ 亚基的 GABAA 受体(δ -GABAA
受体)对 GABA 有高亲和力和低效力,脱敏缓慢,对苯二氮卓类药物不敏感,以及在
表达α 4β δ 受体的不同系统中对酒精均表现出高敏感性。
研究发现突触外δ -GABAA 受体内化可能是酒精引起 GABAA 受体可塑性改变
的“导火索”,PKC 介导的受体磷酸化可能参与酒精调节 GABAA 受体可塑性改变,
但是具体机制和可能参与的 PKC 亚型尚待阐明。本实验在体外原代培养的大鼠海
马神经元中,采用电生理、蛋白生化、分子生物学和荧光成像等技术,研究单次剂
量酒精撤退引起突触外δ -GABAA 受体快速内化的调节机制。我们发现,在单次剂
量酒精(60 mM,30 分钟)或 okadaicacid(100nM,30 分钟)预处理/撤退后 30 分钟,
培养海马神经元突触外δ -GABAA 受体介导的紧张性抑制电流(tonic
current,Itonic)幅度明显减小,急性酒精对 Itonic 的增强作用也显著降低,即
Itonic 急性酒精耐受,提示蛋白磷酸化可能参与了单次剂量酒精撤退诱导的突
触外δ -GABAA 受体功能的降低。
应用 PKC 抑制剂 chelerythrine chloride(10 μ M)处理可以明显挽救单次
剂量酒精撤退引起的 Itonic 幅度下降和急性酒精耐受,但是 PKA 抑制剂 H89(20
μ M)处理则没有明显作用。此外,PKC 激动剂佛波酯(100 nM)处理可引起与单次
剂量酒精或 okadaic acid 处理后相似的 Itonic 幅度下降和急性酒精耐受,而 PKA
激动剂 forskolin(10 μ M)则没有作用,这提示我们 PKC 而非 PKA 介导的受体磷
酸化参与了单次剂量酒精撤退诱导的突触外δ -GABAA 受体的迅速内化。进一步
实验发现抑制 PKC 可以阻断单次剂量酒精撤退