生物学重要仪器

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1、一、显微镜一、显微镜v光学显微镜光学显微镜v荧光显微镜荧光显微镜v激光共聚焦显微镜激光共聚焦显微镜v扫描电子显微镜扫描电子显微镜v透射电子显微镜透射电子显微镜（一）一般光学显微镜（一）一般光学显微镜 1.镜下结构称光镜（镜下结构称光镜（light microscope LM) 结构结构； 2.放大倍数放大倍数1000倍倍； 3.分辨率分辨率0.2m:显微镜可分辨的两点间的最显微镜可分辨的两点间的最小距离，即为显微镜的分辨率，它主要取决小距离，即为显微镜的分辨率，它主要取决于照明波长以及物镜的球差系数。于照明波长以及物镜的球差系数。 4.组织制成薄片，以利光线通过。组织制成薄片，以利光线通过。光

2、学显微镜基本结构光学显微镜基本结构石蜡切片术石蜡切片术(paraffin sectioning)制片过程制片过程（1）取材取材（1.0cm) 固定固定(甲醛）甲醛） 酒精酒精脱脱水水（低（低-高）高） 透明透明（二甲苯）（二甲苯） 浸蜡包埋浸蜡包埋 切片切片（510 um） 展片展片； （2）脱蜡脱蜡（二甲苯）（二甲苯） 酒精（高酒精（高-低）低） 水水 苏木精苏木精-伊红伊红染色染色 酒精酒精脱水脱水（低（低-高）高） 透明（二甲苯）透明（二甲苯） 封片封片（树胶）（树胶）v（3）染色）染色(staining)：v 是用染料使无色组织切片着色，增加对是用染料使无色组织切片着色，增加对 比度，

3、便于镜下观察。染色方法很多，但没比度，便于镜下观察。染色方法很多，但没有一种能使细胞全部结构同时着色。有一种能使细胞全部结构同时着色。 vA.常用的染色方法：常用的染色方法：苏木精苏木精（hematoxylin）：）：细胞核和胞质内的嗜细胞核和胞质内的嗜 碱性物质着蓝紫色碱性物质着蓝紫色 。 伊红伊红（eosin）：）：细胞质基质和间质内的胶细胞质基质和间质内的胶 原纤维等着红色。原纤维等着红色。 H.E小鼠胰岛细胞苏木精小鼠胰岛细胞苏木精-伊伊红（红（HE）染色）染色小鼠宫颈癌肿瘤组织小鼠宫颈癌肿瘤组织病理切片显微镜观察病理切片显微镜观察口腔上皮细口腔上皮细胞胞H.E染色染色B.特殊染色方法

4、特殊染色方法v银染：用硝酸银将神经细胞染为黑色。银染：用硝酸银将神经细胞染为黑色。v醛品红染色：将弹性纤维染为紫色。醛品红染色：将弹性纤维染为紫色。v甲苯胺蓝：将肥大细胞的分泌颗粒染为紫色。甲苯胺蓝：将肥大细胞的分泌颗粒染为紫色。v活体染色：取动物组织材料之前活体注射染活体染色：取动物组织材料之前活体注射染料，观察巨噬细胞的吞噬情况。料，观察巨噬细胞的吞噬情况。神经纤维的硝酸银染色神经纤维的硝酸银染色C.其他制片方法其他制片方法a.冰冻切片：组织液氮骤冷，恒冷箱切冰冻切片：组织液氮骤冷，恒冷箱切 片机切片（糖类、脂类、酶、核酸等）。片机切片（糖类、脂类、酶、核酸等）。b.涂片：将游离的细胞直接

5、涂于切片上。涂片：将游离的细胞直接涂于切片上。c.铺片：将疏松结缔组织或肠系膜等撕铺片：将疏松结缔组织或肠系膜等撕 成薄片铺在载玻片上。成薄片铺在载玻片上。d.磨片：骨和牙等硬组织可磨为薄片磨片：骨和牙等硬组织可磨为薄片。血液涂片血液涂片骨磨片骨磨片（二）体视显微镜（二）体视显微镜v体式显微镜的特点：体式显微镜的特点：v1 双双目镜目镜筒中的左右两光束不筒中的左右两光束不是平行，而是具有一定的夹角是平行，而是具有一定的夹角-体视角（一般为体视角（一般为12度度-15度），度），因此成象具有三维立体感；因此成象具有三维立体感；2 象是直立的，便于操作和解象是直立的，便于操作和解剖，这是由于在剖，

6、这是由于在目镜目镜下方的棱镜下方的棱镜把象倒转过来的缘故；把象倒转过来的缘故；3 虽然放大率不如常规虽然放大率不如常规显微镜显微镜，但其工作距离很长但其工作距离很长4 焦深大，便于观察被检物体焦深大，便于观察被检物体的全层。的全层。5 视场直径大。视场直径大。 体式显微镜下体式显微镜下跳蚤的照片跳蚤的照片（三）荧光显微镜（三）荧光显微镜v荧光显微镜包括一般荧光染色和免荧光显微镜包括一般荧光染色和免疫荧光染色方法疫荧光染色方法,荧光染色方法可以荧光染色方法可以显示细胞内的各种显示细胞内的各种 成份成份,特别是对细特别是对细胞内的两种核酸胞内的两种核酸(DNA或或RNA)及酸及酸性粘多糖有较强的特

7、异性性粘多糖有较强的特异性,所以荧光所以荧光染色法可以作为一种良好的细胞化染色法可以作为一种良好的细胞化学方法学方法.v免疫荧光方法是把免疫学技术和荧免疫荧光方法是把免疫学技术和荧光染色结合起来一种方法光染色结合起来一种方法,它具有免它具有免疫学的特异性和荧光方法的敏感性疫学的特异性和荧光方法的敏感性,作为一种研究方法或实验手段作为一种研究方法或实验手段,广泛广泛地应用于医学领域内各种基础理论地应用于医学领域内各种基础理论研究和临床诊断研究和临床诊断,如组织细胞学如组织细胞学,微生微生物学物学,寄生虫学寄生虫学,病理学的研究以及自病理学的研究以及自身免疫病诊断中得到了广泛应用身免疫病诊断中得到

8、了广泛应用. vHoechest33258荧光染色荧光染色TUNEL染色标记上绿染色标记上绿色荧光色荧光荧光显微镜的基本操作荧光显微镜的基本操作v1关闭房间内的电灯，开启显微镜汞灯；关闭房间内的电灯，开启显微镜汞灯；v2根据样品标记的荧光素选择相应的滤片；根据样品标记的荧光素选择相应的滤片；v3放好样品，找到合适的视野；放好样品，找到合适的视野；v4如需拍照，连上照相机；如需拍照，连上照相机；v5使用结束，关闭所有电源并做好使用录。使用结束，关闭所有电源并做好使用录。v6如需详细说明，请借阅说明书。如需详细说明，请借阅说明书。使用荧光显微镜的注意事项使用荧光显微镜的注意事项 v（1）严格按照荧

9、光显微镜出厂说明书要求进行操作，）严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作，不要随意改变程序。不要随意改变程序。v（2）应在暗室中进行检查。进入暗室后，接上电源，）应在暗室中进行检查。进入暗室后，接上电源，点燃超高压汞灯点燃超高压汞灯515min，待光源发出强光稳定后，待光源发出强光稳定后，眼睛完全适应暗室，再开始观察标本。眼睛完全适应暗室，再开始观察标本。v（3）防止紫外线对眼睛的损害，在调整光源时应戴）防止紫外线对眼睛的损害，在调整光源时应戴上防护眼镜。上防护眼镜。v（4）检查时间每次以）检查时间每次以12h为宜，超过为宜，超过90min，超，超高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱；标本受紫

10、高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱；标本受紫外线照射外线照射35min后，荧光也明显减弱；所以，最后，荧光也明显减弱；所以，最多不得超过多不得超过23h。v（5）荧光显微镜光源寿命有限，标本应集中检查，）荧光显微镜光源寿命有限，标本应集中检查，以节省时间，保护光源。天热时，应加电扇散热降以节省时间，保护光源。天热时，应加电扇散热降温，新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后温，新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再用时，须待灯泡充分冷却后才能点燃。一天中欲再用时，须待灯泡充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。应避免数次点燃光源。v（6）标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐）标本

11、染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4保存，保存，可延缓荧光减弱时间，防止封裱剂蒸发。可延缓荧光减弱时间，防止封裱剂蒸发。v（7）荧光亮度的判断标准：一般分为四级，即）荧光亮度的判断标准：一般分为四级，即“一一”无或可见微弱荧光。无或可见微弱荧光。“+”仅能见明确可仅能见明确可见的荧光。见的荧光。“+”可见有明亮的荧光。可见有明亮的荧光。“+”可见耀眼的荧光。可见耀眼的荧光。（四）扫描电子显微镜（四）扫描电子显微镜（scanning electron microscope，SEM）v扫描电子显微镜于扫描电子显微镜于20世纪世纪6