微生物学-5生长

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1、微生物的生长微生物的生长及控制及控制个体生长个体生长微生物细胞的重量和体积不断增大的过程。微生物细胞的重量和体积不断增大的过程。个体繁殖个体繁殖微生物细胞微生物细胞产生新的生命个体，即引起生命个产生新的生命个体，即引起生命个体数量增加的生物学过程。体数量增加的生物学过程。群体生长群体生长群体中个体数目和重量的增加。可以用重量、群体中个体数目和重量的增加。可以用重量、体积、密度或浓度来衡量。体积、密度或浓度来衡量。 群体生长群体生长 = 个体生长个体生长 + 个体繁殖个体繁殖生长与繁殖的概念生长与繁殖的概念单个细胞或一种细胞群繁殖得到的后代。v对于微生物，由于其主要进行无性f繁殖，故纯培养即为克

2、隆。 v建立纯培养，证实其纯度无可置疑并保 持不受污染是微生物学家最重要的任 务之一。纯培养（pure culture）：）：第一节第一节 微生物的纯培养微生物的纯培养用固体培养基分离纯培养用固体培养基分离纯培养用液体培养基分离纯培养用液体培养基分离纯培养 单孢子或单细胞分离法单孢子或单细胞分离法 利用选择性培养基分离法利用选择性培养基分离法 一、用固体培养基分离纯培养（菌落分离法）一、用固体培养基分离纯培养（菌落分离法）1.平板划线分离法平板划线分离法 用接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无用接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连菌平板表面

3、进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线续划线 ，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。培养后，可在平板表面得到单菌落。 分区划线（适用于分区划线（适用于浓度较大浓度较大的样品）的样品） 连续划线（适用于连续划线（适用于浓度较小浓度较小的样品）的样品）分段划线和连续划线2.稀释倒平板法稀释倒平板法 3.涂布平板法涂布平板法 简单易行，但易造成机械损伤简单易行，但易造成机械损伤涂布平板法涂布平板法连续稀释连续稀释, ,目的是使一支试管中分配不到一个微生物。目的是使一支试管中分配不到一个微生物。适合于优势微生物适合于优势微生

4、物. .二、用液体培养基分离纯培养（液体稀释法）二、用液体培养基分离纯培养（液体稀释法）三、单孢子或单细胞分离法三、单孢子或单细胞分离法 采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养个个体进行培养以获得纯培养 。在显微镜下使用单孢子分离器进行机械操作，挑取单在显微镜下使用单孢子分离器进行机械操作，挑取单孢子或单细胞进行培养。也可以采用特制的毛细管在孢子或单细胞进行培养。也可以采用特制的毛细管在载玻片的琼脂涂层上选取单孢子并切割下来，然后移载玻片的琼脂涂层上选取单孢子并切割下来，然后移到合适的培养基进行培养。到合适的培养基

5、进行培养。 四、选择性培养基分离法四、选择性培养基分离法 为了从混杂的微生物群体中分离出某种微生物，可为了从混杂的微生物群体中分离出某种微生物，可以根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条以根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等，采用选择培养的方法进行分离。件等，采用选择培养的方法进行分离。利用选择培养基进行直接分离利用选择培养基进行直接分离富集培养富集培养微生物纯培养分离方法的比较微生物纯培养分离方法的比较分离方法分离方法应用范围应用范围平皿划线法平皿划线法方法简便，多用于分离细菌方法简便，多用于分离细菌稀释倒平皿法稀释倒平皿法即可定性，又可定量，用途广泛即可定性，又可定量，用途广

6、泛单细胞挑取法单细胞挑取法局限于高度专业化的科学研究局限于高度专业化的科学研究利用选择培养基法利用选择培养基法适用于某些生理类型较特殊的微适用于某些生理类型较特殊的微生物生物第二节第二节 微生物生长的测定微生物生长的测定 评价不同的抗菌物质对微生物评价不同的抗菌物质对微生物产生抑制产生抑制(或杀死或杀死)作用的效果；作用的效果；客观地反映微生物生长的规律；客观地反映微生物生长的规律；评价培养条件、营养物质评价培养条件、营养物质等对微生物生长的影响；等对微生物生长的影响；微微生生物物生生长长微微生生物物生生长长测测量量方方法法计计 数数 法法重重 量量 法法生理指标法生理指标法一、计数法一、计数

7、法1 直接法直接法（全数法）（全数法）1）血球板法）血球板法优点：快捷、简便优点：快捷、简便缺点：缺点：不能区分死菌与活菌；不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；不适于对运动细菌的计数；用于单细胞微生物用于单细胞微生物血球计数板法血球计数板法原理：将原理：将1cm20.1mm的薄层空间划分为的薄层空间划分为400小格，小格，从中均匀分布地选取从中均匀分布地选取80或或100小格，计数其中的细胞小格，计数其中的细胞数目，换算成单位体积中的细胞数。数目，换算成单位体积中的细胞数。血球计数板法血球计数板法2）比浊法）比浊法在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比。在一定范围内，菌悬液中的

8、细胞浓度与混浊度成正比。特点：快速、简便；但易受干扰。特点：快速、简便；但易受干扰。2 间接法（活菌计数法）间接法（活菌计数法）1）2）薄膜过滤计数法薄膜过滤计数法测定含菌量较少的空气和水中的微生物数目。测定含菌量较少的空气和水中的微生物数目。将定量的样品通过薄膜（硝化纤维素薄将定量的样品通过薄膜（硝化纤维素薄膜、醋酸纤维薄膜）过滤，菌体被阻留在滤膜膜、醋酸纤维薄膜）过滤，菌体被阻留在滤膜上，取下滤膜进行培养，然后计算菌落数，可上，取下滤膜进行培养，然后计算菌落数，可求出样品中所含菌数。求出样品中所含菌数。二、重量法二、重量法总氮测定法总氮测定法测定多细胞及丝状真菌生长情况的有效方法测定多细胞

9、及丝状真菌生长情况的有效方法直接法直接法干重干重湿重湿重间接法间接法DNA含量测定法含量测定法三、生理指标测定法三、生理指标测定法样品中微生物数量多或生长旺盛，这些指标愈明显，样品中微生物数量多或生长旺盛，这些指标愈明显，因此可以借助特定的仪器如瓦勃氏呼吸仪、微量量因此可以借助特定的仪器如瓦勃氏呼吸仪、微量量热计等设备来测定相应的指标。热计等设备来测定相应的指标。常用于对微生物的快速鉴定与检测常用于对微生物的快速鉴定与检测微生物的生理指标，如呼吸强度，耗氧量、酶活性、微生物的生理指标，如呼吸强度，耗氧量、酶活性、生物热等与其群体的规模成正相关。生物热等与其群体的规模成正相关。第三节第三节 微生

10、物的生长规律微生物的生长规律 一、细菌群体生长规律一、细菌群体生长规律 （典型生长曲线）两个定义生长曲线生长曲线分批培养分批培养分批培养：分批培养：指微生物在一定容积的培养基中，在特定培养条指微生物在一定容积的培养基中，在特定培养条 件下只完成一个生长循环（最后一次收获）的培件下只完成一个生长循环（最后一次收获）的培 养方法。（养方法。（封闭系统封闭系统） 连续培养：连续培养：指微生物在整个生长时间，以一定的方法（恒浊、指微生物在整个生长时间，以一定的方法（恒浊、 恒化）使微生物持续的以较恒定的生长速率生长恒化）使微生物持续的以较恒定的生长速率生长 的培养方法。（的培养方法。（开放系统开放系统

11、）生长曲线： 将少量单细胞的纯培养，接种到一恒定容积的液体培养基中，在适宜条件下培养，定时取样，测菌量。以培养时间为横坐标，以细菌增长数目的对数为纵坐标，绘制所得的曲线。细菌纯培养群体生长测定根据微生物生长速率常数（每小时的分裂代数）的不同，可分为迟缓期，对数期，稳定期和衰亡期。生长曲线可分：生长曲线可分：延迟期延迟期对数期对数期 衰亡期衰亡期 稳定期稳定期 其它名称：停滞期、调整期其它名称：停滞期、调整期现象：现象：曲线平行于横轴曲线平行于横轴特点：特点：生长速率常数生长速率常数= 0形态变大形态变大合成代谢活跃合成代谢活跃 （核糖体、酶类、（核糖体、酶类、ATP合成加快）合成加快）对不良条