克霉唑药生物限度实验.pdf
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2022-06-25 14:40:57上传
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克霉唑药生物限度实验
1 实验材料及仪器
1.1 仪器与样品
ＨＴＹ-2000 型智能集菌仪、多次使用集菌器、一次性薄膜过滤器
（杭州泰林生物技术设备有限公司）、离心机（800 型沉淀离心机，上
海手术器械十厂）、高压蒸汽灭菌器、电子天平、生物安全柜、生化
培养箱等。克霉唑药膜（规格：4mg，贵州德轩堂制药有限公司生产批
号：051225、051226、051227）。
1.2 培养基、稀释剂及试剂
营养琼脂、营养肉汤、玫瑰红钠琼脂、改良马丁培养基、胆盐乳糖增
菌培养基、溴化十六烷基三甲***琼脂、亚碲酸盐肉汤、甘露醇***化钠
琼脂、0.9%***化钠溶液、pH7.0 无菌***化钠-蛋白胨缓冲液（中国北京
三科科技开发公司生产，按 CP2005 版规定配制及灭菌）［1］。
1.3 试验用菌种
大肠埃希菌 Escherichiacoli、金黄色葡萄球菌
Staphylocoddusaureus、枯草芽孢杆菌 Bacillussubtilis、白色念珠
菌 Candidaaibicans、黑曲霉 Aspergillusniger、铜绿假单胞菌
PseudomonasaeruginosaCMCC（B）10104，菌种均来源于中国医学细菌
保存中心，均为不超过 5 代的菌株［1］。
2 方法
参照 CP2005 年版二部附录微生物限度检查法中计数方法的验证、控
制菌检查方法的验证。
2.1 菌液制备方法
取经（36±1）℃培养 16~18h 的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草
芽孢杆菌肉汤新鲜培养液，加入 0.9%***化钠溶液或营养肉汤，10 倍递
增稀释制成 50~100cfu/ml 菌液，计数备用。取经 26℃培养 24~48h 的
白色念珠菌的改良马丁液体新鲜培养液，用 0.9%***化钠溶液 10 倍稀释
制成 50~100cfu/ml 菌液计数，备用。取经 26℃培养 5~7d 的黑曲霉改
良马丁斜面培养物，加适量 0.9%***化钠溶液洗下孢子，取孢子悬液加
入 0.9%***化钠溶液 10 倍稀释制成 50~100cfu/ml 孢子悬液计数，备用。
2.2 供试液制备方法
取样品 100cm2，加 pH7.0 无菌***化钠-蛋白胨缓冲液 100ml，振摇，
使充分分散均匀，即为 1∶10 供试液；取上述 1∶10 供试液 10ml 加入
pH7.0 无菌***化钠-蛋白胨缓冲液分别至 50、100、200ml，即为 1∶50、
1∶100、1∶200 供试液。
2.3 敏感菌的确定及细菌、霉菌、酵母菌计数方法选择试验及验证试
验方法
为确定克霉唑药膜的敏感菌，选择有效的去除抑菌活性的方法，用
CP2005 年版平皿稀释法、低速离心沉淀处理供试液与平皿稀释法联用、
低速离心沉淀处理供试液与薄膜过滤法联用消除其抑菌活性［
1 实验材料及仪器
1.1 仪器与样品
ＨＴＹ-2000 型智能集菌仪、多次使用集菌器、一次性薄膜过滤器
（杭州泰林生物技术设备有限公司）、离心机（800 型沉淀离心机，上
海手术器械十厂）、高压蒸汽灭菌器、电子天平、生物安全柜、生化
培养箱等。克霉唑药膜（规格：4mg，贵州德轩堂制药有限公司生产批
号：051225、051226、051227）。
1.2 培养基、稀释剂及试剂
营养琼脂、营养肉汤、玫瑰红钠琼脂、改良马丁培养基、胆盐乳糖增
菌培养基、溴化十六烷基三甲***琼脂、亚碲酸盐肉汤、甘露醇***化钠
琼脂、0.9%***化钠溶液、pH7.0 无菌***化钠-蛋白胨缓冲液（中国北京
三科科技开发公司生产，按 CP2005 版规定配制及灭菌）［1］。
1.3 试验用菌种
大肠埃希菌 Escherichiacoli、金黄色葡萄球菌
Staphylocoddusaureus、枯草芽孢杆菌 Bacillussubtilis、白色念珠
菌 Candidaaibicans、黑曲霉 Aspergillusniger、铜绿假单胞菌
PseudomonasaeruginosaCMCC（B）10104，菌种均来源于中国医学细菌
保存中心，均为不超过 5 代的菌株［1］。
2 方法
参照 CP2005 年版二部附录微生物限度检查法中计数方法的验证、控
制菌检查方法的验证。
2.1 菌液制备方法
取经（36±1）℃培养 16~18h 的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草
芽孢杆菌肉汤新鲜培养液，加入 0.9%***化钠溶液或营养肉汤，10 倍递
增稀释制成 50~100cfu/ml 菌液，计数备用。取经 26℃培养 24~48h 的
白色念珠菌的改良马丁液体新鲜培养液，用 0.9%***化钠溶液 10 倍稀释
制成 50~100cfu/ml 菌液计数，备用。取经 26℃培养 5~7d 的黑曲霉改
良马丁斜面培养物，加适量 0.9%***化钠溶液洗下孢子，取孢子悬液加
入 0.9%***化钠溶液 10 倍稀释制成 50~100cfu/ml 孢子悬液计数，备用。
2.2 供试液制备方法
取样品 100cm2，加 pH7.0 无菌***化钠-蛋白胨缓冲液 100ml，振摇，
使充分分散均匀，即为 1∶10 供试液；取上述 1∶10 供试液 10ml 加入
pH7.0 无菌***化钠-蛋白胨缓冲液分别至 50、100、200ml，即为 1∶50、
1∶100、1∶200 供试液。
2.3 敏感菌的确定及细菌、霉菌、酵母菌计数方法选择试验及验证试
验方法
为确定克霉唑药膜的敏感菌，选择有效的去除抑菌活性的方法，用
CP2005 年版平皿稀释法、低速离心沉淀处理供试液与平皿稀释法联用、
低速离心沉淀处理供试液与薄膜过滤法联用消除其抑菌活性［
克霉唑药生物限度实验
