第二章生物工程的一般技术



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1、第二章 生物工程的一般技术p 细胞培养环境 动植物细胞的培养是在人工环境下进行的。这种人工环境除了要能满足培养的生物有机体正常生长和分裂所需营养物质以外,还要保证清洁,没有其他微生物的污染和有害因素的影响,换句话说,细胞培养过程是在无菌条件下进行的。p 细胞培养中常见的污染物及危害一、细菌a革兰氏阳性菌:常见有枯草芽孢杆菌等; 大多数化脓性球菌都属于革兰氏阳性菌,它们能产生外毒素使人致病,常见的革兰氏阳性菌有:葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等。可以选择青霉素族,头孢曲松钠等。 b 革兰氏阴性菌:大肠杆菌、假单胞菌等。 大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌,它们产生内毒素
2、,靠内毒素使人致病.常见的革兰氏阴性菌有痢疾杆菌、伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌、霍乱弧菌及脑膜炎双球菌等。革兰氏阴性菌则对青霉素不敏感,可以选择氟喹诺酮类药物如诺氟沙星,左氧氟沙星等,也可以选择大环内酯类比如克拉霉素、罗红霉素等。革兰氏染色法p用结晶紫液加碘液染色,再用95%酒精脱色,然后用稀复红液染色。经过这样的处理,有的细菌被染成紫色,是革兰氏阳性菌,有的被染成红色,是革兰氏阴性菌。p 受到细菌污染后,培养液会变浑浊,ph会发生变化,细胞的正常生命活动受到影响,发生生理病变,最终死亡。二、真菌真菌,是一种真核生物。生活中最常见的真菌是各类蕈类,另外真菌也包括霉菌和酵母
3、。 p 受真菌污染的危害 p 收到真菌污染后,培养液一般不浑浊,但在培养液中可见白色或黄色的小点或小球,在显微镜下观察这些点,可见丝状、管状或树枝状的菌丝密集交错而成。培养液中的真菌会利用培养基中的养分迅速成长,因而使培养细胞的生长变慢,最终因缺乏营养与毒害作用而死亡。p 三、其他污染因素支原体病毒非同种细胞p因此 控制污染是细胞培养的关键!第一节 细胞培养无菌操作与常用设备定义: 用于培养系统的无菌状态和防止微生物进入无菌范围的一系列操作技术一、细胞培养无菌操作要点简介:1、进行无菌操作前,必须带好帽子、口罩,用洗涤剂洗净双手并擦干。 2、进行无菌操作时首先将双手和手臂用70%酒精消毒。3、